Высокочувствительный анализ интактных белков с использованием линейного TOF

Введение

JMS-S3000 SpiralTOF^TM имеет уникальный 17-метровый путь полета, который предлагает самое высокое разрешение системы MALDI-TOFMS, доступное в настоящее время. Однако ионы с очень коротким временем жизни или те, которые подвергаются спонтанной диссоциации во время своего полета, не могут быть обнаружены SpiralTOF (или обычным отражательным TOF). Чтобы решить эту проблему, можно использовать SpiralTOF с опцией Linear TOF для высокочувствительного анализа интактных белков.

В данной работе мы демонстрируем измерение интактных белков с использованием опции Linear TOF для системы JEOL SpiralTOF.

Экспериментальный

Стандарты белков были получены от Sigma-Aldrich.

• Пепсин (слизистая оболочка желудка свиньи), P-6887

• Альбумин (бычья сыворотка), А8471

• Кональбумин (белок куриного яйца), C0755

• IgG (бычья сыворотка), I5506

Стандартные образцы белка растворяли в воде в концентрации 1 пмоль/мкл. Синапиновая кислота (SA) использовалась в качестве матрицы и растворялась в 1:1 вода/ацетонитрил, содержащий 0.1% трифторуксусной кислоты. Затем стандартный раствор белка и раствор SA смешивали в соотношении 1:1 по объему. После этого 0.5 мкл этой смеси помещали на целевую пластину MALDI (250 фмоль/пятно). Наконец, высушенный образец измеряли с помощью опции Linear TOF, доступной на JMS-S3000 SpiralTOF^TM Система МС.

Рисунок 1. SpiralTOF с опцией линейного TOF

Рисунок 2. Масс-спектр MALDI белковых стандартов, (a) Пепсин (250 фмоль/пятно),
(b) Альбумин (250 фмоль/пятно) (c) Кональбумин (250 фмоль/пятно), (d) IgG (250 фмоль/пятно).

Результаты и обсуждение

Масс-спектры MALDI показаны на рисунке 2 для каждого образца белка. Пики, соответствующие одно- и двухзарядным протонированным молекулам, наблюдались при ожидаемом м / г значения первичной структуры этих белков.

Предусмотрена опция SpiralTOF с линейным TOF

• Хорошая форма пика в верхней части м / г область

• Превосходное соотношение сигнал/шум для этих образцов при данной концентрации (250 фмоль)

Высококачественные масс-спектры были получены для целых белков с использованием системы JEOL JMS-S3000. Также стоит отметить, что Linear TOF может измерять целые молекулы до м / г 500,000 XNUMX (данные не показаны в этих примерах).

Решения по областям применения

Биология / Науки о жизни

Еда / Растения

Медицина

Химия

Сопутствующие продукты

JMS-S3000 SpiralTOF™-plus 3.0 Времяпролетный масс-спектрометр с матричной лазерной десорбцией/ионизацией

Категория продукта

Времяпролетный масс-спектрометр с матричной лазерной ионизацией (MALDI-TOFMS)