В смоле CLEM с раствором для восстановления флуоресценции

В последнее время с помощью оптических микроскопов с использованием флуоресцентных красителей и флуоресцентных белков стали наблюдать различные физиологические явления и локализации биологических веществ. CLEM — это метод наблюдения за одним и тем же образцом с помощью оптических и электронных микроскопов и объединения этих изображений наблюдения для интеграции информации, полученной каждым прибором. Поэтому для такого слияния изображений требуется высокоточное выравнивание. Однако флуоресценция флуоресцентных красителей и белков, наблюдаемая с помощью оптического микроскопа, гасится подготовкой образцов для наблюдения под электронным микроскопом (фиксация, дегидратация, заливка смолой, и т.д), Наблюдение с помощью оптического микроскопа и наблюдение с помощью электронного микроскопа должны были выполняться в разных условиях. CLEM-красный^*1 представляет собой флуоресцентный белок, который восстанавливает флуоресценцию при обработке раствором для восстановления флуоресценции (раствор TUK^*2) даже после фиксации глутаровым альдегидом или четырехокисью осмия, и эта флуоресценция сохраняется даже после заливки в смолу. Используя CLEM-Red и раствор для восстановления флуоресценции, мы можем наблюдать ультратонкие срезы после заливки смолой с помощью флуоресцентных микроскопов, что обеспечивает высокую точность CLEM.

протокол

^{* 1,2} CLEM-Red, раствор TUK являются продуктами Fujifilm Wako Pure Chemical Corporation.

Результаты

Явление деградации ненужных органелл и белков в клетках называется аутофагией. При этой аутофагии наблюдается аутофагосома, представляющая собой мембранную структуру, окружающую ненужные вещества. Было высказано предположение, что белок р62 играет важную роль в формировании этой аутофагосомы. Клетки HeLa, сверхэкспрессирующие слитый белок p62 и CLEM-Red, наблюдались в смоле CLEM.
В результате этого наблюдения слитый белок CLEM-red-p62 был локализован в структуре масляных капель клетки, а в соседней области образовались аутофагосомы.

Образец: Hela Cell, pCLEM-Red-p62
Конфокальный микроскоп: A1 (Nikon)
Сканирующий электронный микроскоп: JSM-7900F (JEOL)

Образец положения
Д-р Исей Танида, проф. Ясуо Учияма (университет Дзюнтендо, Токио)

ID

Танида И., Харута Т., Суга М., Такей С., Такебе А., Фурута Ю., Ямагучи Дж., Олива
Трехо Дж. А., Какута С., Учияма Ю. Мембранные структуры напрямую вступают в контакт
С корпусами p62/SQSTM1.
J Гистохим Цитохим. 2021 июнь; 69 (6): 407-414.